UHPLC(超高效液相色譜)是一種高效的色譜分析技術(shù),常用于藥物、化學(xué)、生物等領(lǐng)域的分析和質(zhì)量控制。UHPLC色譜柱是UHPLC技術(shù)的核心組成部分,其性能直接影響到色譜分析的效率和準(zhǔn)確性。粒徑一般在1.7-2.5μm之間,比傳統(tǒng)的HPLC色譜柱小很多,這意味著在相同的柱長度和流速下,能提供更高的分離效率和靈敏度。此外,效率高也意味著可以使用更短的柱長度來完成同樣的分離,從而縮短分析時間和降低成本。
UHPLC色譜柱需要在高壓力下工作,因此需要具備很高的耐壓性。一般來說,UHPLC色譜柱的承受壓力可以達到10000 psi(約690 bar),比傳統(tǒng)的HPLC色譜柱高出很多。高耐壓性使UHPLC色譜柱在高流速下工作時更加穩(wěn)定可靠,并能處理更為復(fù)雜的樣品。分離效果很好,能夠有效地分離復(fù)雜的混合物,從而提高分析的精度和準(zhǔn)確性。UHPLC色譜柱的分離能力主要依賴于其表面性質(zhì)。一般來說,使用親水性或疏水性色譜柱可以對不同類型的化合物進行有效的分離。
以下是選購UHPLC色譜柱時需要注意的幾個方面:
目標(biāo)化合物:首先需要確定所要檢測的化合物的類型、分子量、極性和穩(wěn)定性,并根據(jù)這些信息來挑選色譜柱。根據(jù)化合物的性質(zhì)選擇合適的色譜填料類型、孔徑大小、抗污染性等參數(shù),以確保樣品可以得到分離結(jié)果。
色譜柱長度:牢記短柱更適合快速分離,其中長柱則更適合提取完整的化合物混合物。在大多數(shù)情況下,色譜柱長度為50毫米時便能同時滿足高效分離和容易維護的條件。
列直徑:該指標(biāo)在UHPLC色譜柱中非常重要,直徑越小列才能走得越快,且填料間越接近,這樣就可以使各種化學(xué)物質(zhì)留在柱內(nèi)的時間更短,從而提高空穴率。選擇列管內(nèi)徑時需根據(jù)所要檢測樣品類型的不同來進行選擇。
色譜柱的類型:針對分析方法的不同,選擇不同類型的色譜柱。例如,對于氨基酸蛋白質(zhì)層析,可選擇有機硅柱或堿性物質(zhì)柱,對于肽類氧化或N-甲化,選用親水性畫紙或Polar派系固定相柱等,以達到分離結(jié)果。